|
本發(fā)明屬于單克隆抗體制備技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種通用型全豬源單克隆抗體的制備方法。本發(fā)明基于單個(gè)B細(xì)胞抗體制備技術(shù)，通過流式細(xì)胞分選技術(shù)從免疫豬或臨床康復(fù)豬外周血中分離出抗原特異性單個(gè)B淋巴細(xì)胞；根據(jù)數(shù)據(jù)庫中豬源免疫球蛋白IgG抗體基因序列，分別設(shè)計(jì)引物特異性擴(kuò)增豬源單個(gè)B細(xì)胞中抗體重鏈和輕鏈完整編碼基因并加入His標(biāo)簽，以pCDNA3.1?Leader為真核表達(dá)載體，構(gòu)建抗體輕重鏈完整編碼基因重組載體，通過哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)天然全豬源單克隆抗體。本發(fā)明首次建立一種通用型全豬源單克隆抗體制備方法，可用于不同病原的豬源單克隆抗體庫的制備及篩選，相較于其他抗體制備方法具有高通量、全豬源、多樣性好、抗體完整且天然配對(duì)等優(yōu)勢(shì)，為快速制備和篩選豬源單克隆抗體提供技術(shù)支撐，具有廣泛的應(yīng)用前景。
|
打印
